Enterococcus faecalis fiofilm: formation and development in vitro observed by scanning electron microscopy

Se realizó la detección de biofilm de Enterococcus faecalis aislados de conductos radiculares, desarro llándolos en microcubetas realizando tinción con Cristal Violeta 10 por ciento, elución con alcohol y tres procedimientos: sin fijar, fijación con calor y fija ción con formaldehido 10 por ciento. Se evaluó el biofilm formado realizando la lectura con lector de microplaca Versamax-Microplate-Reader (USA). Se incubaron 20 porciones radiculares estériles en el medio TS caldo con E. faecalis (108) durante 48 hs, 4, 7, 14 y 30 días.Transcurrido cada tiempo experimental se procesaron y observaron al microscopio electrónico de barrido (MEB). Se evidenció significativamente mayor formación de biofilm en microplacas cuando se realizó fijación con formaldehido, que al fijar con calor y sin fijar (ANOVA p<0,0001). Al MEB seobservó crecimiento del E. faecalis en todos los tiempos y desarrollo de biofilm a partir de 14 días de incubación. La fijación con formaldehido 10% fue la técnica más apropiada para detectar biofilm de E. faecalis desarrollado enmicroplacas. Mediante el MEB se confirmó la formación de biofilm después de 14 días de incubación...

Detection of viable and viable nonculturable Vibrio cholerae O1 through cultures and immunofluorescence in the Tucumán rivers, Argentina

Vibrio cholerae has been sporadically isolated from rivers in Tucumán, Argentina, since the outbreak in 1991. The aim of this study was to determine the environmental reservoir of the bacterium in these rivers, assessing the presence of Vibrio cholerae non-O1 and O1 (the latter both in its viable culturable and non culturable state) and its relationship to environmental physicochemical variables. 18 water samplings were collected in the Salí River (in Canal Norte and Banda) and the Lules River between 2003 and 2005. Physical-chemical measurements (pH, water temperature, electrical conductivity and dissolved oxygen) were examined. Vibrio cholerae was investigated with conventional culture methods and with Direct Immunofluorescence (DFA-VNC) in order to detect viable non culturable organisms. All isolated microorganisms corresponded to Vibrio cholerae non-O1 and non-O139 (Lules 26 percent, Canal Norte 33 percent and Banda 41 percent). The majority was found during spring and summer and correlated with temperature and pH. Non culturable Vibrio cholerae O1 was detected year round in 38 of the 54 water samples analyzed. Application of the Pearson correlation coefficient revealed that there was no relationship between positive immunofluorescence results and environmental physicochemical parameters. Genes coding for somatic antigen O1 were confirmed in all DFA-VNC-positive samples, whereas the virulence-associated ctxA and tcpA genes were confirmed in 24 samples.

Vibrio cholerae tem sido isolado esporadicamente nos rios da Província de Tucumán, Argentina, desde outubro de 1991. O objetivo deste estudo foi localizar os reservatórios nestes rios, identificar a presença de Vibrio cholerae O1 (em estado cultivável e não cultivável) e relacionar a presença desta bactéria com as variações físico-químicos da água. Foram coletadas dezoito amostras de água do rio Salí (nas localidades de Canal Norte e Banda) e do rio Lules, entre 2003 e 2005. Estas foram submetidas a análises físico-químicos como determinação de pH, temperatura, condutibilidade elétrica e oxigênio dissolvido. A presença de Vibrio cholerae foi verificada por métodos de cultivo convencional e por imunofluorescência direta (DFA-VNC). Todos os microrganismos isolados foram não O1 e não O139 (Lules 26 por cento, Canal Norte 33 por cento e Banda 41 por cento). A maioria foi encontrada na primavera e verão, indicando uma relação com a temperatura e pH. Das 54 amostras analisadas por DFA-VNC, 38 Vibrio cholerae não cultivável, foram detectadas em todas as épocas do ano. As amostras positivas foram confirmadas por PCR para o antígeno somático O1 e para os genes de virulência ctxA e tcpA. Coeficiente de correlação de Pearson revelou que não há relação entre os resultados obtidos por imunofluorescência e a variação dos parâmetros físico-químicos.